在实验之前偶尔所需检查肝细立方体的酪氨酸状况，这里揭示了几种相似的酪氨酸检查步骤，想只能帮到你。
一肝细立方体酪氨酸的形体学检查
愈演愈烈酪氨酸的肝细立方体在形体上有一定的均观上。
激光全像和倒置全像
未皮肤上肝细立方体：酪氨酸肝细立方体的微积变小、反转，肝上皮细立方体原始但出有现塑料现象，肝细立方体酪氨酸晚期可见酪氨酸小微。贴壁肝细立方体出有现皱缩、变圆、脱落。
皮肤上肝细立方体：常以姬姆萨皮肤上、瑞氏皮肤上等。酪氨酸肝细立方体的皮肤上质并成品、排斥，核反应上皮细立方体聚合、皮肤上质划分并成块圆锥形和酪氨酸小微等众所周知的酪氨酸形体。
白光全像和总共揭示激光扫描全像
一般以肝真核反应细立方体皮肤上质的形体学扭转为测试方法则来评判肝细立方体酪氨酸的进展状况。
常以的 DNA 特异性染剂有：HO 33342（Hoechst 33342），HO 33258（Hoechst 33258），DAPI。三种染剂与 DNA 的联结都是非嵌入式的，主要联结在 DNA 的 A-T 碱基区。紫均光随之而来时火箭明亮的蓝色白光。
Hoechst 是与 DNA 特异联结的活着性染剂，储存尿液用氢氧化钠混和 1 mg/ml 的剂用量，运用于时用 PBS 挥发，自知剂用量为 10 μg/ml。
DAPI 为半内皮细胞，运用于常规单独肝细立方体的皮肤上。储存尿液用氢氧化钠混和 1 mg/ml 的剂用量，运用于自知剂用量一般为 10 μg/ml。
结果评判
肝细立方体酪氨酸全过程之前肝真核反应细立方体皮肤上质的形体学扭转分并成三期：Ⅰ 期的肝真核反应细立方体呈波纹圆锥形（rippled）或呈折缝样（creased），大部分皮肤上质出有现并成品圆锥形体；Ⅱa 期肝真核反应细立方体的皮肤上质颇高度凝聚、排斥；Ⅱb 期的肝真核反应细立方体聚合为劈开，消除酪氨酸小微（所示 1）。
透射电子全像通过观察
结果评判
酪氨酸肝细立方体微积变小，肝细立方体膜并成品。酪氨酸Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的肝真核反应细立方体内皮肤上质颇高度盘绕，出有现许多专指气穴现象（citations）的空泡结构；Ⅱa 期肝真核反应细立方体的皮肤上质颇高度凝聚、排斥；肝细立方体酪氨酸的晚期，肝真核反应细立方体聚合为劈开，消除酪氨酸小微（所示 2）。
二Annexin V 法则
磷脂酰酪氨酸（Phosphatidylserine, PS）偶尔性坐落肝上皮细立方体的下方，但在肝细立方体酪氨酸的以前，PS 可从肝上皮细立方体的下方翻滚到肝上皮细立方体的均层，暴露在肝细立方体均周围环境之前（所示 3）。Annexin-V 是一种分子用量为 35～36 KD 的 Ca2+ 依赖性磷脂联结细立方体内，能与 PS 颇高亲和力特异性联结。将 Annexin-V 透过白光素（FITC、PE）或 biotin 上面，以上面了的 Annexin-V 作为白光磁性，利用流式肝细立方体祯或白光全像可检查肝细立方体酪氨酸的愈演愈烈。
碲丙啶（propidine iodide, PI）是一种核反应酸染剂，它不用透过原始的肝上皮细立方体，但在酪氨酸之前晚期的肝细立方体和死肝细立方体，PI 只能透过肝上皮细立方体而使肝真核反应细立方体红染。因此将 Annexin-V 与 PI 匹配运用于，就可以将酪氨酸早晚期的肝细立方体以及死肝细立方体区分开来。
步骤
水或肝细立方体的皮肤上：将偶尔性人才和诱发酪氨酸的水或肝细立方体（0.5～1×106）用 PBS 后下 2 次，转到 100 μl Binding Buffer 和 FITC 上面的 Annexin-V（20 μg/ml）10 μl，常压避光 30 min，便转到 PI（50 μg/ml）5 μl，避光丝氨酸 5 min 后，转到 400 μl Binding Buffer，立即用 FACScan 透过流式肝细立方体精定用量检查（一般不有约 1 h）， 同时以不赞 AnnexinV-FITC 及 PI 的一管作为阴性对照。
贴壁人才的肝细立方体皮肤上：先用 0.25% 的胰蛋白消化，净化、皮肤上和深入科学研究同水或肝细立方体。
爬到片肝细立方体皮肤上：同上，最后用白光全像和总共揭示激光扫描全像透过通过观察。
结果
留意事项
1. 整个操作姿势要尽用量自如，务必用力吹打肝细立方体。
2. 操作时留意避光，丝氨酸顺利完成后尽快在一不间断内检查。
三核反应糖微上皮细立方体动能的检查
核反应糖微在肝细立方体酪氨酸的全过程之前起着主干线作用，多种肝细立方体酪氨酸冲动变异仅可诱发各有不同的肝细立方体愈演愈烈酪氨酸，而核反应糖微跨去极化（Δψm）的回升，被认为是肝细立方体酪氨酸级联丝氨酸全过程之前最初愈演愈烈的惨案，它愈演愈烈在肝真核反应细立方体酪氨酸均观上（皮肤上质并成品、DNA 崩落）出有现之前，一旦核反应糖微跨去极化衰弱，则肝细立方体酪氨酸不可逆转。
核反应糖微跨去极化的普遍存在，使一些亲脂性阳离子白光染剂如 Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide（DiOC6）、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide（JC-1）、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可联结到核反应糖微基质，其白光的增强或减慢所述核反应糖微内上皮细立方体电负性的减小或提高。
步骤
将偶尔性人才的肝细立方体和诱发酪氨酸的肝细立方体转到运用于自知剂用量为 Rhodamine 123（1 mM）或自知剂用量为 DiOC6（25 nM），JC-1（1 mM），TMRM（100 nM），37 °C 平衡 30 min，流式肝细立方体若按检查肝细立方体的白光风速。
留意事项
1. 即便如此保持平衡染尿液之前 pH 差值的相容性，因为 pH 差值的愈演愈烈变化将制约去极化。
2. 与染剂远超平衡的肝细立方体悬尿液之前如果所含有细立方体内，他们将与大部分染剂联结，提高染剂的剂用量，造并成了假去极化。
四DNA 片段化检查
肝细立方体酪氨酸时主要的药剂均观上是其皮肤上质愈演愈烈并成品，皮肤上质 DNA 在核反应小微一个单位两者之间的前端崩落，转变并成 50～300 kbp 总长的 DNA 广阔段，或 180～200 bp 整数倍的寡核反应苷酸片段，在黏性液相上展现出为梯形液相所示谱（DNA ladder）。
肝细立方体经处理惨案后，有别于常规步骤受控提纯 DNA，透过琼脂糖黏性液相和溴化乙啶皮肤上，在酪氨酸肝细立方体群之前可通过观察到众所周知的 DNA ladder。如果肝细立方体用量很少，还可在受控提纯 DNA 后，用 32P-ATP 和核反应酸核反应苷酸两端移出蛋白（TdT）上面 DNA，然后透过液相和辐射线自照相，通过观察酪氨酸肝细立方体之前 DNA ladder 的转变并成。
大分子性皮肤上微 DNA 片段的测定
肝细立方体酪氨酸的以前，性皮肤上微崩落被选为 50～300 kbp 总长的 DNA 广阔段。所有有约一定分子用量大小的双链 DNA 分子在琼脂糖黏性之前的迁到更快相同。线性 DNA 的双螺旋直径有约黏性直径时，即远超分辨力的临界点。此时黏性才会按分子用量的大小来筛分 DNA，DNA 像通过弯管一样，以其一端直指电场一极而通过黏性，这种迁到模式被称作「爬到行」。因此，肝细立方体酪氨酸以前消除的 50～300 kbp 总长的 DNA 广阔段不用用一般来说的琼脂糖黏性液相来受控。
通常有别于振荡器液相新科技可有缘地解决这一问题。这个步骤是在黏性上均赞向用量的交变振荡器电场。每当电场路径扭转后，大的 DNA 分子没多久滞留在爬到行管之前，直至新的电场轴向重新定向后，才能独自向前飘移。DNA 分子用量越，这种烷基化所所需的一段时间就越总长。当 DNA 分子微分路径的一段时间之比电振荡器周期时，DNA 就可以按其分子用量大小分开。
DNA Ladder 测定
步骤
翻身肝细立方体（1×107）水合→肝细立方体聚合尿液→13 000 rpm ×5 min→得来上乾隆年间，赞 1% SDS 和 RnaseA（5 mg/ml）56 °C，幼鸟 2 h→细立方体内蛋白 K（2.5 mg/ml）37 °C，2 h→1/10 微积 3 mol/l 醋酸钠和 2.5 倍微积的冷无水乙醇水合 DNA，4 °C 清早→14 000 rpm×15 min→最后将水合蒸发在 TE buffer 之前，赞 DNA Loading Buffer→1.2% 琼脂糖黏性液相，EB 皮肤上并照相。
结果
酪氨酸肝细立方体 DNA 所含用量比的流式肝细立方体若按深入科学研究
步骤
得来肝细立方体→70% 冷乙醇（PBS 挥发）4 °C 单独清早→PBS 净化，1 000 rpm × 10 min→RNase A（0.5 mg/ml）37 °C 消化 30 min→PI（50 mg/ml）皮肤上，常压避光 15 min→FACScan 深入科学研究 DNA 亚二倍微的转变并成及肝细立方体周期的愈演愈烈变化。
结果
ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay
优点：准确性颇高，适合于检查少用量样本，小大部分酪氨酸肝细立方体。如均科活着有组织检查。
五TUNEL 法则
肝细立方体酪氨酸之前，性皮肤上微 DNA 双链崩落或单链崩落而消除大用量的粘性 3'-OH 两端，可在核反应酸核反应苷酸两端移出蛋白（TdT）的作用下，将核反应酸核反应苷酸和白光素、催化反应蛋白、碱性磷酸蛋白或糖类转变并成的衍生物上面到 DNA 的 3'-两端，从而可透过酪氨酸肝细立方体的检查，这类步骤专指核反应酸核反应苷酸两端移出蛋白酪氨酸的第二道两端上面法则（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。
由于偶尔性的或正在细立方体分裂的肝细立方体几乎无法则 DNA 的崩落，因而无法则 3'-OH 转变并成，很少只能被皮肤上。TUNEL 实际上是分子生物学与形体学相联结的科学研究步骤，对原始的单个酪氨酸肝真核反应细立方体或酪氨酸小微透过原位皮肤上，能确切地丝氨酸肝细立方体酪氨酸众所周知的微生物学和形体均观上，可运用于石蜡包埋有组织基底、冰冻有组织基底、人才的肝细立方体和从有组织之前受控的肝细立方体的肝细立方体形体测定，并可检查出有极少用量的酪氨酸肝细立方体，因而在肝细立方体酪氨酸的科学研究之前被广泛有别于。
六Caspase-3 活着性的检查
Caspase 远亲在酪氨酸肝细立方体酪氨酸的全过程之前起着极其重要的作用，其之前 Caspase-3 为关键的执行分子，它在酪氨酸信号传导的许多途径之前起到动态。Caspase-3 偶尔性以蛋白原（32 KD）的形式普遍存在于立方体浆之前，在酪氨酸的以前过渡期，它被激活着，活着化的 Caspase-3 由两个大结构域（17 KD）和两个小结构域（12 KD）组并成，聚合相应的立方体浆立方体核反应丝氨酸，最自知引发肝细立方体酪氨酸。但在肝细立方体酪氨酸的晚期和死亡肝细立方体，Caspase-3 的活着性明显回升。
Western blot
深入科学研究 Procaspase-3 的活着化，以及活着化的 Caspase-3 及对丝氨酸多聚（ADP-核反应糖）聚合蛋白（PARP）等的聚合。
步骤
得来肝细立方体→PBS 净化→抽提肝细立方体聚合尿液→细立方体内定用量→SDS-PAGE 液相→纤维素上皮细立方体或 PVDF 上皮细立方体移出→5% 脱脂封闭，常压 1.5～2 h 或 4 °C 清早→Caspase-3 多抗或他汀常压丝氨酸 1～2 h 或 4 °C 清早→TBS-T（所含 0.05% Tween 20 的 TBS）后下 3 次，5～10 min/次→HRP-上面的牛抗鼠 IgG 或 AP 上面的牛抗鼠 IgG 常压丝氨酸 1～2 h→ TBS-T 后下 3 次， 5～10 min/次→ECL 照相或 NBT/BCIP 水溶性。
结果
白光测光光度若按深入科学研究
活着化的 Caspase-3 只能特异切割 D1E2V3D4-X 丝氨酸，水解 D4-X 抑制剂键。根据这一特点，设若按出有白光颗粒酪氨酸的短抑制剂 Ac-DEVD-AMC。在总阴离子酪氨酸时，AMC 不用被随之而来白光，短抑制剂被水解后释换出有 AMC，自由的 AMC 才能被随之而来火箭白光。根据释换的 AMC 白光风速的大小，可以测定 Caspase-3 的活着性，从而所述了 Caspase-3 被活着化的某种程度。
步骤
翻身肝细立方体偶尔性或酪氨酸肝细立方体→PBS 净化→制备肝细立方体聚合尿液→赞 Ac-DEVD-AMC（caspase-3 白光丝氨酸）→37 °C 丝氨酸 1 h→白光测光光度若按（Polarstar）深入科学研究白光风速（随之而来光波总长 380 nm，火箭光波总长为 430～460 nm）。
结果
流式肝细立方体精深入科学研究
步骤
翻身肝细立方体偶尔性或酪氨酸肝细立方体→PBS 净化→赞 Ac-DEVD-AMC→37 °C 丝氨酸 1 h→UV 流式肝细立方体若按深入科学研究 Caspase-3 阳性肝细立方体数和平仅白光风速。
结果
七TFAR19 细立方体内理解和肝细立方体相对于深入科学研究
TFAR19（PDCD5）是由本科学研究室在国际上首先引述的一个拥有自己著作权的人类新基因，后期的动态科学研究所述，它是促进肝细立方体酪氨酸的增强剂。利用白光素（FITC）上面的 TFAR19 单克隆抗微为磁性，对肝细立方体酪氨酸全过程之前 TFAR19 细立方体内的理解低水平及相对于科学研究挖掘出，酪氨酸以前 TFAR19 理解低水平减小并出有现较慢核反应可有现象，随之而来着肝真核反应细立方体形体学的愈演愈烈变化，长时间较总长一段时间，在酪氨酸小微之前仍然可见。
同时我们挖掘出，酪氨酸以前 TFAR19 细立方体内的核反应可有早于磷脂酰酪氨酸（PS）均翻和肝真核反应细立方体 DNA 的片段化，提醒 TFAR19 细立方体内的核反应可有是肝细立方体酪氨酸更以前愈演愈烈的惨案之一。更进一步的科学研究证明了，酪氨酸以前 TFAR19 的核反应可有很强普遍意义，各有不同肝细立方体酪氨酸以前仅出有现 TFAR19 颇高理解和核反应可有。这为科学研究肝细立方体酪氨酸以前所愈演愈烈的惨案，提供了一种新的新科技和测试方法则。
TFAR19 细立方体内的肝细立方体相对于深入科学研究
胶合板路易斯酸
FITC 上面的单克隆抗微，pH 7.4 、0.15 mol/L PBS，3% 的多聚甲醛，PBS-T（pH 7.4 、0.15 mol/L PBS 所含 0.2% Tween 20），胎牛肝细立方体，白光肝细立方体后下尿液（pH 7.4 、0.15 mol/L PBS 所含 2% 胎牛肝细立方体及 0.1% NaN3），FACS 管，Tip 头，移尿液器。
祯器
低压低水平方式中，37 °C 水浴箱，白光全像，总共揭示激光扫描全像，流式肝细立方体祯。
步骤
1. 水或肝细立方体的皮肤上
（1）翻身偶尔性和诱发酪氨酸的肝细立方体（0.5～1×106），PBS 后下 2 次，1 000 rpm×10 min。
（2）3% 多聚甲醛冰浴 10 min，PBS 后下 2 次，1 000 rpm×10 min。
（3）转到 PBS-T 溶尿液，37 °C 幼鸟 15 min，PBS 后下 2 次，1 000 rpm×10 min。
（4）转到 200 ml 胎牛肝细立方体，常压丝氨酸 30 min。
（5）转到 5 ml FITC 上面的 TFAR19 他汀（自知剂用量为 1:40），4 °C 丝氨酸 30 min。
（6）白光肝细立方体后下尿液后下 2 次，1 000 rpm×10 min。
将肝细立方体水合滴片，白光全像及总共揭示激光全像下通过观察 TFAR19 在肝细立方体之前的相对于。同时用流式肝细立方体祯定用量检查 TFAR19 细立方体内的平仅白光风速。
2. 贴壁肝细立方体的原位皮肤上
（1）贴壁生总长的比差值期肝细立方体石板在 24 孔或 6 孔支架之前（内有洁净盖玻片），让其爬到片生总长，待总长到 50%～80 % 满时，酪氨酸诱发剂处理惨案肝细立方体。
（2）将各有不同一段时间点处理惨案的肝细立方体透过免疫白光皮肤上，皮肤上步骤同上。
（3）将皮肤上的爬到片肝细立方体换于一张滴有少用量（5 ml）的载玻片上，白光全像或总共揭示激光扫描全像通过观察 TFAR19 在肝细立方体之前的相对于。
3. 均科病理基底的皮肤上、检查
4. 原代肝细立方体的人才、检查
5. 深入科学研究 TFAR19 细立方体内在人微内各有组织器官的分布及相对于
TFAR19 细立方体内的理解与均科癌症
ELISA 法则检查偶尔性人和癌症圆锥形体下，以及癌症的各有不同初，肝细立方体之前 TFAR19 细立方体内低水平及其 TFAR19 自身抗微低水平。
胶合板和路易斯酸
1. 特罗斯季亚涅齐 Buffer：pH 9.6， 0.05 mol/L 碳酸盐 Buffer
2. 净化尿液： pH 7.4，0.15 mol/L PBS 所含 0.05% Tween 20
3. 封闭尿液： 3% BSA（用净化尿液配制）
4. 蛋白标抗微的挥发：用封闭尿液挥发
5. OPD 丝氨酸 Buffer：Na2 HPO4·12 H2O 1.84 g，柠檬酸 0.51 g，DDW 100 ml
6. 水溶性尿液（现配现用）：丝氨酸 Buffer 10 ml，OPD 2 mg，30% H2O2 2 ml
7. 告一段落尿液 2 mol/L H2SO4
8. 重新组建人 TFAR19，HRP 上面的牛抗人 IgG9 ELISA 支架，Tip，移尿液器，ELISA Reader（OD 490 nm），后下支架机
操作步骤
1. 用特罗斯季亚涅齐 Buffer 挥发的重新组建人 TFAR19（1 mg/ml）特罗斯季亚涅齐 ELISA 支架，100 ml/well，37 °C 幼鸟 2 h 或 4 °C 清早（一般 24 h 以上）。
2. 净化 Buffer 后下支架三次，转到封闭尿液，200 ml/well ， 37 °C 幼鸟 2 h 或 4 °C 清早。
3. 净化 Buffer 后下支架三次，转到各有不同挥发度的病人肝细立方体（3 个重复孔）100 ml/well ，37 °C 幼鸟 1 h。设特罗斯季亚涅齐 Buffer、净化 Buffer 、封闭尿液为阴性对照。
4. 净化 Buffer 后下支架三次，转到 1:2 500 挥发的 HRP 上面的抗人 IgG， 100 ml/well，37 °C 幼鸟 1 h。
5. 净化 Buffer 后下支架三次，转到水溶性尿液，100 ml/well，避光丝氨酸 10～15 min。
6. 转到 H2SO4 告一段落丝氨酸，50 ml/well。
7. ELISA Reader 加载 OD 490 光密度差值，深入科学研究和较为病人肝细立方体和偶尔性滴血 乾隆年间之前 TFAR19 自身抗微的理解低水平。
8. Western blot 深入科学研究原发性肝细立方体和偶尔性肝细立方体的 TFAR 19 细立方体内的理解低水平。
参考文献
Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-3039
Herrmannm M, Lorenz HM, Voll R et al. A Rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments. Nucleic Acid Res. 1994; 22:5506-5507
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编辑： 任悠悠相关新闻
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